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RNA结合蛋白免疫沉淀结合高通量测序(RIP-seq)

  • 技术简介
  • 服务内容
  • 文章导读

技术简介

简介

RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工 具,能帮助发现miRNA的调节靶点。RIP技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析。RIP是染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等)。RNA免疫共沉淀测序(RIP-seq),将RIP与新一代测序技术结合起来,在基因组范围内发现与蛋白或蛋白复合物相结合的RNA。

实验原理

  • 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。
  • 防止非特异性的RNA的结合。
  • 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。
  • 结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip),定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定。

服务内容

1.RIP-seq建库流程

RIP

2.RIP-seq分析流程

RIP-seq v2.2

3.RIP-seq分析结果展示

result1

4.我们的优势

  • 拥有标准化操作实验室和高通量测序技术平台,质量可靠。
  • 拥有Illumina HiSeq 2500、MiSeq等多种高通量测序平台。
  • 技术人员经验丰富,可以根据合作伙伴要求提供实验方案、解决实验问题、分析实验结果。
  • 拥有专业的生物信息团队和大型计算机,可以为合作伙伴提供个性化的生物信息分析服务。

文章导读

CELF1 preferentially binds to exon-intron boundary and regulates alternative splicing in HeLa cells

CELF1 preferentially binds to exon-intron boundary and regulates alternative splicing in HeLa cells

2017年9月7日

RNA结合蛋白(RBPs)参与到了转录后调控,包括RNA的可变剪接,RNA的空间折叠,从而导致RNA的表达量的变化。因此精确确定RBPs在RNA上的结合位置和结合特点是至关重要的。目前已经有成功解析RBP结合位点的方法,如CLIP-seq。但CLIP-seq也有很多的缺陷:如实验复杂,成功率低,文库的丰富度不够。和CLIP-seq比较类似的RIP-seq,虽然少了一些步骤,但获得的结果和CLIP-seq比较类似。最近有一项研究报道,使用DO-RIP-seq技术,也可以成功地获得RBPs的结合位点。而且能够获得更好的丰富度,这为RIP-seq分析RBPs的结合位点提供了方案和依据。

Mitochondrial iron chelation ameliorates cigarette smoke–induced bronchitis and emphysema in mice

Mitochondrial iron chelation ameliorates cigarette smoke–induced bronchitis and emphysema in mice

2016年5月30日

慢性阻塞性肺部疾病(Chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是一种复杂,削弱肺部功能的疾病,主要临床和病理表现包括从气道炎症(慢性支气管炎),肺组织破坏(肺气肿)小气道重塑等(1,2)。COPD的发病机制至今仍然不明确,但是它涉及到肺部对香烟烟雾(cigarette smoke, CS)的异常炎症和细胞反应失调(1)。目前研究表明吸烟和遗传是COPD最大的危险因素(3)。本文作者之前通过对人类全基因组进行全基因组关联分析(genome-wide association studies, GWAS)确定IRP2(也称为IREB2)是COPD的主要候选基因(4-6),此后作者证明IRP2蛋白在COPD患者的肺部含量增加(4)。已有的研究表明IRP2基因位于人类15q25染色体上,该染色体上还包括编码烟碱乙酰胆碱受体的几个部件的基因。此外 GWAS分析表明15q25还与肺癌,外周动脉疾病和尼古丁成瘾相关(7-10)。铁调节蛋白(The iron-regulatory proteins, IRPs)IRP1和IRP2尤其是IRP2负责调节哺乳动物体内细胞铁离子的平衡(11)。IRPs在十二指肠,脊髓和中枢神经扮演非常重要的生理角色,同时IRPs也可能是肺动脉高压和神经性病变等疾病发病原因(12-15)。在细胞内铁耗尽的情况下,IRPs通过与位于mRNA上铁体内平衡基因的铁反应元件(iron-response elements, IREs)结合,导致其翻译被抑制从而降低铁的储存并同时增加铁摄取(12,15)。但是IRP2在肺部的生理功能以及IRP2的mRNA转录还不是很清楚,同时IRP2在肺部暴露在香烟烟雾中COPD发病的响应机制也不是很明确。因此,作者试图通过将COPD实验中小鼠模型和人COPD数据整合,阐述由香烟烟雾引起的COPD中IRP2的功能。

RIP-seq analysis of eukaryotic Sm proteins identifies three major categories of Sm-containing ribonucleoproteins.

RIP-seq analysis of eukaryotic Sm proteins identifies three major categories of Sm-containing ribonucleoproteins.

2014年10月16日

Sm 蛋白是一类高度保守RNA结合蛋白家族,广泛存在于生物界中。Sm蛋白在真核生物中由七个亚基组成,呈环状结构,能与相关的RNAs结合形成RNP(ribonucleoprotein,核糖核蛋白)。

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武汉生命之美科技有限公司成立于2010年7月,是一家专注于将高通量测序技术(NGS)转化为科学发现和产业应用的生物高科技企业。生命之美使用新一代测序技术和RNA-蛋白质互作的科学技术优势,短短数年时间,就成长为一个拥有强大实验室和科研实力的合作平台。生命之美不但已经与各高校、研究所的实验室一起合作science,也启动了与普通大众一起science的模式,希望以健康产品服务每一名个体。生命之美为爱和梦想而来,它期待着与中国、一带一路各国乃至全球的伙伴们一起做一个前所未有的科学梦:用科学祝福全球!

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公司动态
  • 热烈祝贺生命之美CEO张翼博士荣获省级荣誉
    2020年10月26日
  • 生命之美与华农赵凌课题组合作文章发表于Genome Biology
    2020年9月17日
  • 生命之美与上交大团队合作文章发表于PLoS Pathogens
    2020年9月17日
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